兔子E選擇素ELISA試劑盒

　1.間接ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒） 本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）為例，間接ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）的操作程序如下。 　?。?） 材料 　　① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液； 　?、?DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清；待檢鴨血清； 　　③ ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 　　（2） 方法步驟 　?、?加抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 　?、?加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干 　　③ 加酶標抗體 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干 　?、?加底物液 → 37℃ 30分鐘，加終止液 　?、?用ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。 　　（3） 結果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知陽性血清的OD值≥0.4；在上述條件成立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性，否則判為陰性。 　　2.雙抗體夾心ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒） 本法主要用于檢測大分子抗原?，F以檢測雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）為例介紹本法的操作程序。 　?、?加抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 　?、?加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加底物液 → 37℃ 15分鐘，加終止液 　　⑤ 用ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）檢測儀測定OD值。

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　被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產生有色產物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結合的標記抗原的量就越少，有色產物就減少，這樣根據有色產物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結構不同，還需應用不同的結合方法。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。5.阻斷ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒） 本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。≒R）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）檢測法為例介紹其操作程序： 　?、?100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干 　?、?用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干 　　⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干 　?、?加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液 　?、?用ELISA（酶聯免疫吸附試驗,酶聯免疫試劑盒）檢測儀測定OD值。 　　本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。 　

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